生（shēng）物實驗室常識
2021-02-10 10:58:03
保存（cún）在冰箱中的酚，容（róng）易被空氣氧化而變成粉（fěn）紅（hóng）色，這樣的酚容易降解DNA，一般不可以使用。為（wéi）了防（fáng）止酚的氧化，可（kě）加入0.1%的8-羥基喹（kuí）啉及少量巰（qiú）基乙醇。8-羥基喹（kuí）啉（lín）是帶有淡黃色的（de）固體粉沫，不僅能抗氧化，並在一定程（chéng）度上能抑製（zhì）DNase的活性（xìng）。
2.如何將不同構型的質粒DNA區別開？
由於不同構型的DNA在瓊脂糖凝膠電泳中的遷移率不同，ccc DNA的泳動速度最快，通（tōng）過（guò）凝（níng）膠（jiāo）電泳方法可將不同構型的DNA區別開。
3.用酚-氯仿抽提細胞基因組DNA時，通常要在酚-氯（lǜ）仿中加少許異戊醇（chún），為什麽？
異（yì）戊醇可以（yǐ）降低表麵張力，從而減少氣泡（pào）產生。另外，異戊醇有助於（yú）分（fèn）相，使離心後的上層含DNA的水相、中間的變性蛋白相及下層有機溶劑相維持穩定。
4.用乙醇沉澱DNA時，為什麽加入單價的（de）陽離子？
用乙醇沉澱DNA時，通常要在溶液中加入（rù）單價的陽離子，如NaCl 或 NaAc，Na+中和（hé）DNA分子上的負電荷（hé），減少DNA分子之間的同性電荷相斥（chì）力，而易於聚集（jí）沉澱（diàn）。
5.在提取（qǔ）RNA時經常使用異硫氰酸胍，有什麽作（zuò）用？
RNA是一種極易（yì）降解的核酸分子（zǐ）。高濃度強變性劑異硫氰酸胍使細胞結構迅速（sù）被破壞，使RNA從細胞中釋放出來。同時高濃度異硫氰酸胍還使細胞內的RNA酶失活，使釋放出的RNA不被降解（jiě）。
6.蛋白印跡中封閉液的作用？
封閉液的作（zuò）用是封閉未吸附蛋（dàn）白的部位，以（yǐ）減少非特異性結合背景的影響（xiǎng）。常（cháng）用的封閉液有脫脂奶粉、小牛血清（qīng）等。
7.DNA通常保存在什麽緩衝液中？
采（cǎi）用TE緩衝液，Tris-HCl的緩衝係統，加（jiā）入EDTA可以螯合二價金屬離子進而抑（yì）製依賴於二價金屬離子的DNA酶（méi）的活性，對DNA起到保護作用。
8.在酶（méi）切反應緩衝液中（zhōng）為什麽（me）加入BSA？
通過提高溶液中蛋（dàn）白質的（de）濃度，對酶起保（bǎo）護（hù）作用。
9.簡單的克隆載體（tǐ）必需包括什麽？
複製起點；選擇標記：主要是抗性基因；多克隆位點：便於（yú）外源DNA的插（chā）入。
10.用（yòng）酚抽提細胞DNA時，有什麽作用？
使蛋白質變性。
11.在分離DNA時，要使用EDTA，為什麽？
EDTA是金屬離子螯合劑，螯合二價離子，抑製核酸酶的活性。
12.在分離DNA過程中，造（zào）成DNA分子斷裂的因素有哪些？
核酸酶降（jiàng）解；化學降解；物理剪切。
13.使用離心機應（yīng）注意什麽？
首先應該根據（jù）自己的實驗需求選擇合適的離心機和轉子以及離心管，使（shǐ）用離心機時（shí）的工作轉速不應該超過離心機、轉子（zǐ）以及離心管的最大允許轉速。離心前（qián）注意嚴格平衡樣品。安裝轉子和轉子蓋要規範、準確。離心時要留人看守，發現離心機異常應立即關閉離心機。離心（xīn）結束後要安放好轉子。
14.分子生物學實驗室常用的滅菌方法有哪些？
高壓蒸（zhēng）汽滅菌、幹熱滅菌、化（huà）學藥劑消毒、過濾除（chú）菌
15.使用移液（yè）器有哪些注意（yì）事項？
垂直吸液、慢吸慢放；選擇合適的量程（chéng）範圍，不能超（chāo）過量程使用；選擇與移液器匹配的槍（qiāng）頭（tóu），安裝槍頭時（shí）不要用力太猛；移液器每日（rì）用完後，應旋（xuán）到最大刻度。